產(chǎn)品概述：
本試劑盒采用SDS堿裂解法，結(jié)合DNA 制備膜選擇性吸附DNA。同時(shí)采用特殊溶液（Buffer ETR 和 Buffer PF）有效去除內(nèi)毒素，可從1-4 ml（OD600為1-1.5）細(xì)菌培養(yǎng)物中提取出多至30 μg高純度質(zhì)粒DNA，其內(nèi)毒素水平控制在0.1 EU/μg以下。
一、試劑盒組成、貯存、穩(wěn)定性
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Cat.No. |
UE-MN-EP-50 |
UE-MN-EP-150 |
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Kit size |
50 preps |
150 preps |
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Miniprep column |
50 |
150 |
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2 ml Collection tube |
50 |
150 |
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RNase A |
30 μl |
90 μl |
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Buffer S1 |
15 ml |
45 ml |
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Buffer S2 |
15 ml |
45 ml |
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Buffer S3 |
21 ml |
63 ml |
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Buffer W1 |
30 ml |
90 ml |
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Buffer W2 concentrate |
24 ml |
72 ml |
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ET-free water（70%Ethanol） |
18 ml |
54 ml |
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Eluent A |
12 ml |
36 ml |
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Buffer ETR |
9 ml |
27 ml |
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Buffer PF |
2.5 ml |
7.5 ml |
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Protocol manual |
1 |
1 |
RNase A：50 mg/ml，室溫可貯存6個(gè)月，長(zhǎng)期貯存于-20 ℃ 。
Buffer S1：細(xì)菌懸浮液。加入 RNase A后，混合均勻，4℃貯存。
Buffer S2：細(xì)菌裂解液（含SDS/NaOH），室溫密閉貯存。
Buffer S3：中和液，室溫密閉貯存。
Buffer W1：洗滌液，室溫密閉貯存。
Buffer W2 concentrate：去鹽液。使用前，按試劑瓶上指定的體積加入無(wú)水乙醇（可用100%乙醇或 95%乙醇）?；旌暇鶆颍覝孛荛]貯存。
ET-free water（70% Ethanol）：使用前，按試劑瓶上指定的體積加入無(wú)水乙醇（可用100%乙醇或95%
乙醇）。混合均勻，室溫密閉貯存。
Eluent A：洗脫液。室溫密閉貯存。
Buffer ETR：內(nèi)毒素去除液。室溫密閉貯存。
Buffer PF：分相緩沖液。室溫密閉貯存。
二、注意事項(xiàng)
1. 細(xì)菌過(guò)量將影響細(xì)菌裂解、質(zhì)粒DNA 的釋放，導(dǎo)致內(nèi)毒素含量過(guò)高。
2. 步驟3和步驟4的操作必須溫和。劇烈搖晃將導(dǎo)致基因組 DNA 的污染。但混合必須充分，否則影響得率。
3. 使用前，檢查Buffer S2 是否出現(xiàn)沉淀，如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)于37℃溫浴加熱溶解并冷卻至室溫后使用。
4. Buffer S2 、Buffer S3和 Buffer W1和 Buffer B含刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套和防護(hù)眼鏡，避免沾染皮膚、眼睛和衣物，謹(jǐn)防吸入口鼻。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要立即用大量清水或生理鹽水沖洗，必要時(shí)尋求醫(yī)療咨詢。
三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1. 第一次使用前，RNase A全部加入Buffer S1中 ，4℃貯存。
2. 準(zhǔn)備無(wú)核酸和核酸酶污染的Tip 頭、離心管。
3. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定體積的無(wú)水乙醇。
4. 第一次使用前，ET-free water（70%Ethanol）中加入指定體積的無(wú)水乙醇。使用前置于-20℃預(yù)冷。
5. Eluent A在 65℃預(yù)熱后使用，能提高質(zhì)粒得率。
6. Buffer ETR 使用前放到4℃預(yù)冷。
7. 準(zhǔn)備42 ℃水浴。
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