產(chǎn)品概述：
本試劑盒用于從各種動物組織、植物組織、細(xì)胞、細(xì)菌、酵母和絲狀真菌中提取總RNA。提取的總RNA分子完整、純度高，適用于Northern Blot 、RT-PCR、體外翻譯、Primer Extension 、S1核酸酶作圖、RNase 保護(hù)測定、構(gòu)建 cDNA 文庫等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
一、試劑盒組成、貯存、穩(wěn)定性
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Cat.No. |
UE-MN-MS -RNA-10 |
UE-MN-MS -RNA-50 |
UE-MN-MS -RNA-250 |
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Kit size |
10 preps |
50 preps |
250 preps |
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Spin/vac mini column |
10 |
50 |
250 |
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2 ml microfuge tube |
10 |
50 |
250 |
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1.5 ml microfuge tube |
20 |
100 |
500 |
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Buffer R-I |
5 ml |
25 ml |
125 ml |
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Buffer R-Il |
2 ml |
10 ml |
50 ml |
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Buffer W1A concentrate |
5 ml |
24 ml |
120 ml |
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Buffer W2 concentrate |
5 ml |
24 ml |
2x72 ml |
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Buffer TE（nuclease-free） |
2 ml |
6 ml |
30 ml |
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Protocol manual |
1 |
1 |
1 |
Buffer R-I：細(xì)胞裂解液。室溫密閉貯存。
Buffer R-Il：中和液。室溫密閉貯存。
Buffer W1A concentrate：洗滌液。使用前，按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇（可用100% 乙醇或95%乙醇）?；旌暇鶆?，室溫密閉貯存。
Buffer W2 concentrate：去鹽液。使用前，按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇（可用100% 乙醇或95%乙醇）?；旌暇鶆颍覝孛荛]貯存。
Buffer TE（DNase &RNase-free）：洗脫液。10 mM Tris-HCI，0.1 mM EDTA，pH 7.5。室溫密閉貯存。
二、注意事項(xiàng)
Buffer R-I和Buffer W1A含刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套和眼鏡，避免沾染皮膚、眼睛和衣服，謹(jǐn)防吸入口鼻。若沾染皮膚、眼睛時，要立即用大量清水或生理鹽水沖洗，必要時尋求醫(yī)療咨詢。
常見問題解答：
◆RNA提取得率低
·該組織或者細(xì)胞中RNA含量偏低
不同細(xì)胞和組織中RNA的豐度不同，如肝臟，胰腺，心臟等是高豐度組織(總RNA含量2-4 μg/mg)，腦，胚胎，腎臟，肺，胸腺，卵巢等是中豐度組織(總RNA含量0.05-2 μg/mg)，膀胱，骨，脂肪等是低豐度組織(總RNA含量<0.05 μg/mg)。
·組織起始量太少或者太多
樣品量過少，則細(xì)胞組織中RNA含量較低；樣品量過多則可能超過裂解液的裂解能力，裂解將不完全，從而導(dǎo)致RNA得率低。
·取樣為上清液時，盡量吸盡上清（如細(xì)胞培養(yǎng)上清）。
·洗脫液溫度過低
可以將洗脫液在65℃預(yù)熱后使用。
◆OD260/OD280比值偏低
·蛋白質(zhì)污染
在加入R-II中和離心后避免將沉淀物轉(zhuǎn)移到RNA結(jié)合膜上。
·用水稀釋樣品
RNA應(yīng)使用TE Buffer稀釋后再進(jìn)行吸光度值的測定，低離子強(qiáng)度或低pH值溶液會使OD280值升高。
·多糖或多酚的殘留
一些特殊的組織和植物中，多糖、多酚含量較多，這些殘留也會導(dǎo)
致OD260/OD280比值偏低。因此，從這類材料中提取RNA時，需要注意多糖、多酚雜質(zhì)的去除。
·確定Buffer W1A和Buffer W2中加入的乙醇是否是100%無水乙醇/95%乙醇，加入體積是否正確。
◆RNA降解
·材料保存不當(dāng)
使用的組織材料不夠新鮮。提取RNA的組織材料應(yīng)采用新鮮的組織材料，或?qū)⑿迈r的組織材料用液氮迅速冷凍后置于-80℃保存。絕不能未經(jīng)液氮速凍而直接保存于-80℃冰箱中。
·裂解液用量不足
如果試劑沒有問題，且外源性污染也可以排除，那么降解幾乎都來自裂解液的用量不足。如果將裂解液直接加入培養(yǎng)皿中裂解樣品，一定要使裂解液完全浸沒樣品。
·特殊材料
某些富含內(nèi)源核酸酶的樣品(如肝臟，胸腺等)，即使使用電動勻漿器勻漿也不能避免RNA的降解。更可靠的方法是：在液氮條件下將組織研碎，并且勻漿時使用更多裂解液。
·外源RNA酶的污染
試劑，器械及實(shí)驗(yàn)環(huán)境中的RNA酶進(jìn)入實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)。
·內(nèi)源RNA酶的污染
實(shí)驗(yàn)樣品過多；勻漿時溫度過高。
◆基因組DNA污染
·樣品用量過多
樣品用量超出了裂解液Buffer R-I的處理范圍。請選擇合適的樣本處理量。
·樣品中含有有機(jī)溶劑（如乙醇、DMSO等）
避免這些會引起裂解液性質(zhì)改變的物質(zhì)。
·加入Buffer R-II離心后，取上清時避免吸入沉淀。
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